Prueba PCR para Tuberculosis

PCR para Tuberculosis
Es un examen rápido de biología molecular que detecta el ADN de la bacteria, identifica resistencia a medicamentos y ofrece resultados en pocas horas, que detecta el material genético del complejo Mycobacterium tuberculosis y mutaciones asociadas a resistencia a fármacos como la rifampicina o la isoniazida.

Imagen obtenida de: https://www.cdi.net.co/tienda/examenes-de-tuberculosis/56-pruebas-moleculares-para-m-tuberculosis.html

Tipos de muestras biológicas:

Muestras de tejido fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE), obtenidas mediante biopsia de pacientes con sospecha de tuberculosis extrapulmonar.

Extracción de ADN: Se extrajo el ADN total de muestras FFPE previamente desparafinadas mediante el Maxwell CSC DNA FFPE Kit (Promega). 

Imagen obtenida de: https://consultorsalud.com/oms-prueba-tuberculosis-xpert-mtb-rif-ultra/

Tipo de PCR:
En este estudio se utilizó la Droplet Digital PCR (ddPCR), una técnica que divide la muestra en miles de microgotas para amplificar y cuantificar de forma absoluta el ADN de Mycobacterium tuberculosis. 

Proceso de extracción de ADN (desde la lisis)

Las muestras de tejido fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE), obtenidas mediante biopsia de pacientes con sospecha de tuberculosis extrapulmonar, fueron desparafinizadas antes de la extracción del ADN. Posteriormente, se añadió un buffer de lisis junto con Proteinasa K para romper las células y digerir las proteínas. La mezcla se incubó a 56 °C durante 30 minutos y luego a 80 °C durante 4 horas para revertir los enlaces cruzados generados por la fijación con formalina. Después se agregó RNasa A para eliminar el ARN residual. Finalmente, el lisado se procesó con el Maxwell CSC DNA FFPE Kit (Promega), el cual purificó el ADN mediante partículas magnéticas y permitió obtener ADN listo para su análisis por Droplet Digital PCR (ddPCR).

Genes implicados

Los genes utilizados en la ddPCR fueron:

• IS6110: elemento multicopia específico del complejo Mycobacterium tuberculosis, utilizado para aumentar la sensibilidad de la detección y cuantificación del ADN bacteriano.
• rpoB: gen de copia única empleado para confirmar la presencia de Mycobacterium tuberculosis y cuantificar su ADN.
• ALB (albúmina humana): gen de referencia utilizado para normalizar la cantidad de ADN extraído y expresar los resultados como copias de ADN de Mycobacterium tuberculosis por 10⁶ células.

Imagen obtenida de: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0123-93922007000200005

Tipo de resultados cualitativos o cuantitativos:
Son cuantitativos: La ddPCR permitió cuantificar de forma absoluta el ADN de Mycobacterium tuberculosis, expresando los resultados como copias de ADN por $10^6$ células. Además, el estudio evaluó el rendimiento diagnóstico mediante indicadores como sensibilidad, especificidad y límite de detección (LOD).

Imagen obtenida de: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34589075/

Referencias:
1)Mansfield M, et al. Diagnostic performance of Xpert MTB/RIF Ultra compared with Xpert MTB/RIF for pulmonary tuberculosis and rifampicin resistance detection: a systematic review and meta-analysis. Microbiol Spectr. 2022;10(3):e02345-21. doi:10.1128/Spectrum.02345-21. Disponible en: https://journals.asm.org/doi/10.1128/spectrum.02345-21

2)Rozales FP, Machado ABMP, De Paris F, Zavascki AP, Barth AL. PCR to detect Mycobacterium tuberculosis in respiratory tract samples: evaluation of clinical data. Epidemiol Infect. 2014;142(7):1517-1523. doi:10.1017/S0950268813002598. Disponible en: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9151241/

3)Antonello M, D'Angeli A, Bortolami A, et al. Rapid Detection and Quantification of Mycobacterium tuberculosis DNA in Paraffinized Samples by Droplet Digital PCR: A Preliminary Study. Front Microbiol. 2021;12:727774. doi:10.3389/fmicb.2021.727774. Disponible en: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC8475183/

4)Promega Corporation. Maxwell® CSC DNA FFPE Kit Technical Manual [Internet]. Madison (WI): Promega Corporation; 2022 [citado 3 de agosto del 2026 ]. Disponible en: https://www.promega.com/resources/protocols/technical-manuals/101/maxwell-csc-dna-ffpe-kit-protocol/

Anexo de utilización de IA: